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微生物染色的注意事項：

1、 待檢菌菌齡應為18-24小時。一般情況下，革蘭氏陰性菌的染色反應較為穩(wěn)定，不易受菌齡的長短影響；而革蘭氏陽性菌，有的在幼齡時呈陽性，超過24小時可變?yōu)殛幮浴９逝囵B(yǎng)物越陳舊，菌細胞衰老、死亡，則染色常為陰性，造成錯判。

2、 涂片以勻薄為佳，切不可濃厚。過于密集的菌體，因洗脫不勻常呈假陽性。鏡檢革蘭氏染色反應時，要以分散開的細菌著色為準。涂片后不宜用火焰烤干，宜自然干燥；若經(jīng)火焰固定時，應以不燙手為度，以免菌體受損，致使染色反應不準。

3、 革蘭染色操作的關鍵步驟是對脫色的掌握，脫色時間不足，革蘭氏陰性菌可染成陽性結果；脫色過度，革蘭氏陽性菌會染成陰性結果。故應注意掌握，以無紫色脫出時立即水洗。脫色時間應根據(jù)涂沫厚薄、涂片含水量多少適當掌握，涂沫厚、涂片含水少（水洗后瀝干水分）時，脫色時間稍長；涂沫薄、涂片含水量多（未瀝干）時，脫色時間稍短，在20-30秒內調整。

4、 碘液配制后，應裝在密閉的暗色瓶內儲存。如因儲存不當，部分碘將被揮發(fā)或被還原，碘液由原來的紅棕色變?yōu)榈S色，以至影響固定結晶紫的作用，故不宜再用。

5、 革蘭氏染色能否獲得滿意的結果，與操作者的經(jīng)驗有很大關系。操作沒有把握或對染液有懷疑時，應以對照菌同時染色。

微生物培養(yǎng)，是指借助人工配制的培養(yǎng)基和人為創(chuàng)造的培養(yǎng)條件（如培養(yǎng)溫度等），使某些（種）微生物快速生長繁殖。微生物培養(yǎng)可分為純培養(yǎng)和混合培養(yǎng)，前者是指對已純化的單一菌種進行培養(yǎng)和利用；后者是指對混合菌種或自然樣品（如土壤）中的微生物進行培養(yǎng)，然后根據(jù)培養(yǎng)基上所生長微生物的種類和數(shù)量，可在程度上估算土壤中微生物的多樣性與數(shù)量。微生物培養(yǎng)需要用到培養(yǎng)基，根據(jù)微生物的不同種類和生活習性來配制特定的培養(yǎng)基。微生物培養(yǎng)成功的關鍵在于無菌操作，如果培養(yǎng)器具和培養(yǎng)基不能滅菌、培養(yǎng)的過程中有雜菌污染是很容易失敗的。常用的微生物培養(yǎng)基可分為基礎培養(yǎng)基、分離培養(yǎng)基、運送保存增菌培養(yǎng)基、生化試驗培養(yǎng)基、藥物敏感試驗培養(yǎng)基、細菌L型培養(yǎng)基、真菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)基、支原體衣原體和螺旋體培養(yǎng)基、病毒培養(yǎng)基等多種培養(yǎng)基。常用的培養(yǎng)基有LB培養(yǎng)基、SOB培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基、沙保羅瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、SM懸浮培養(yǎng)基、ADF培養(yǎng)基等。

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